細胞凍存生物材料準備

生物材料準備

    生物材料凍存前進行的準備工作可能會(hui) 對凍存結果產(chan) 生影響。對於(yu) 非複製性材料，如組織，核酸和蛋白等，準備過程包括確認生物材料處於(yu) 合適的溶液或凍存培養(yang) 基中，此步驟的目的在於(yu) 複蘇時達到zui大化的預期用途。然而，活細胞和微生物的穩定性及複蘇活力受生長條件和凍存前準備工作的影響。

    細胞凍存前需考慮多種因素，包括細胞類型、活力、生長條件、生理狀態、數目以及細胞前處理等。當建立一個(ge) 新分離株或細胞係的初次種子儲(chu) 備時，必須對培養(yang) 物進行檢測並消毒，確保微生物汙染的zui小化。每次準備工作後，以及每次準備新批次的培養(yang) 物時，均要重複這個(ge) 步驟。

微生物

    生長於(yu) 通氣培養(yang) 條件下的微生物細胞，特別是細菌和酵母，表現出比生長於(yu) 非通氣條件下的細胞更強的耐受冷卻和凍存傷(shang) 害 的能力。T.Nei 認為(wei) ，在通氣培養(yang) 條件下，細胞通透性更好，且開放條件下培養(yang) 細胞在冷卻過程中比非通氣條件下培養(yang) 的細胞失水更快。另外，針對微生物細胞，在對數生後期及穩定期早期獲得的細胞表現出更強的冰凍耐受性。從(cong) 生長後期和靜態培養(yang) 早期收集的微生物細胞比生長早期和生長晚期的細胞表現了更強的冰凍耐受性。

    一般來講，初始凍存的細胞數目越多，複蘇率越高。對於(yu) 大多數細菌和酵母而言，保證約 07/ml 的細胞數才能確保足夠數量的細胞複蘇。由於(yu) 這些細胞可便捷地從(cong) 瓊脂培養(yang) 板或斜麵上收集，如果需要更大量的細胞，也可使細胞生長於(yu) 液體(ti) 培養(yang) 基中通過離心收集，在任何一種情況下，細胞通常懸浮在包含凍存保護劑的新鮮培養(yang) 基中。原生生物可以通過離心濃縮，但通常需要懸浮於(yu) 使用的培養(yang) 基中，之後使用等體(ti) 積含凍存保護劑的新鮮培養(yang) 基稀釋。

    針對芽孢菌凍存，需要收集芽孢並重懸於(yu) 含凍存保護劑的新鮮培養(yang) 基中。凍存前，必須縮短操作時間且確保芽孢並未萌發。針對非芽孢菌凍存，凍存前需采用特殊程序收集菌絲(si) 體(ti) 。某些具硬菌絲(si) 體(ti) 的真菌，需將含有菌絲(si) 體(ti) 的瓊脂塊從(cong) 培養(yang) 基中切出，並將其置於(yu) 含凍存保護劑的新鮮培養(yang) 基中。硬菌絲(si) 體(ti) 無法與(yu) 瓊脂培養(yang) 基很好粘附，生長於(yu) 肉湯培養(yang) 基中時，凍存前需將菌絲(si) 體(ti) 團進行混合。

    凍存材料的活力和複蘇率由凍存前後的培養(yang) 和生長狀態決(jue) 定。活力是衡量培養(yang) 物生長和繁殖的一項指標。例如原生生物材料等某些材料，需經過多次傳(chuan) 代才能保證其穩定性。複蘇細胞數量的估算有多種方法，包括連續稀釋，平板計數或直接細胞計數。通過對比凍存前和複蘇後細胞數量的差異，可說明細胞複蘇程度 或凍存過程是否成功。