如何選擇適合的細胞分離

    從(cong) 樣品中分離提純同種試劑盒，是許多下遊應用的關(guan) 鍵一步，分離得到的細胞可以用於(yu) 基因鑒定、大鼠小鼠hth体育下载地址計數、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體(ti) 互作以及細胞間相互作用等研究。

    一款合適的分離試劑盒可以說是實驗成功的保障，因為(wei) 隻有獲得正確的hth体育下载地址，下遊的分析結果才可能準確。目前，市麵上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇，它們(men) 的主要區別在於(yu) 分離方法和篩選標誌。那麽(me) ，如何選擇自己的細胞分離試劑盒呢？

正向選擇VS負向選擇

    試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩(liang) 種，正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒直接結合的抗體(ti) 來進行捕獲。這種抗體(ti) 通常與(yu) 磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體(ti) -磁珠-複合物提取出來，再通過二抗將磁珠與(yu) 目標分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體(ti) 包被磁珠，不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的，來間接捕獲目的。

    這兩(liang) 種細胞分離試劑盒如何取舍，主要取決(jue) 於(yu) 目標細胞的表麵是否具有特異性強的篩選標誌。這樣的篩選標誌能夠實現特異性的捕獲，避免所獲得的細胞被非目標細胞汙染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標誌，那麽(me) 正向選擇的細胞分離試劑盒就是選擇。但如果目標細胞並不具有特異性強的篩選標誌，那我們(men) 還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。

篩選標誌的確定

    通過PubMed等數據庫中的文獻，我們(men) 一般可以確定在目標上表達的篩選標誌。如果文獻中找不到適合自己的表麵標誌，我們(men) 還可以用目標的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結果會(hui) 顯示，目標細胞上可能表達的表麵標誌，在此基礎上可以選取用於(yu) 捕獲的細胞表麵蛋白。舉(ju) 例來說，對一個(ge) T進行BLAST搜索，結果會(hui) 顯示該是否表達CD4或CD8。在得知目標表達CD4之後，我們(men) 可以先對樣品進行一個(ge) 免疫實驗（如ELISA），以檢驗BLAST搜索的結果。一旦證實目標的確表達CD4，我們(men) 就可以用相應試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。

一般流程

    對於(yu) 一個(ge) 旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說小鼠hth体育下载地址，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與(yu) anti-CD4抗體(ti) 包被的磁珠共同孵育，使抗體(ti) 與(yu) CD4+ T結合。然後洗去不需要的非目標（即不表達CD4的），留下磁珠-抗體(ti) -複合物。hth体育下载地址將上述複合物與(yu) 能結合anti-CD4抗體(ti) 的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體(ti) -二抗複合物。我們(men) 可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體(ti) -二抗複合物，而所有的CD4+細胞留在上清中。zui後，隻需將上清轉移就可以進行下遊研究了。