體外培養基傳代細胞製備操作方法

(一)原理

    體(ti) 外培養(yang) 基的原代細胞或細胞株要在體(ti) 外持續地培養(yang) 就必須傳(chuan) 代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，並維持細胞種的延續。培養(yang) 的細胞形成單層匯合以後，由於(yu) 密度過大生存空間不足而引起營養(yang) 枯竭，將培養(yang) 的細胞分散，從(cong) 容器中取出，以:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yang) ，即為(wei) 傳(chuan) 代培養(yang) 。

    細胞“一代”指從(cong) 細胞接種到分離再培養(yang) 的一段期間，與(yu) 細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳(chuan) 代後，一般經過三個(ge) 階段：遊離期、指數增生期和停止期。

    常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／00個(ge) 細胞。一般細胞分裂指數介於(yu) 0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。細胞接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力時期，稱指數增生期(對數生)，適宜進行各種試驗。

(二)操作

．將長成單層的原代培養(yang) 細胞或HeLa細胞從(cong) 二氧化碳培養(yang) 箱中取出，在超淨工作台中倒掉瓶內(nei) 的培養(yang) 基液，加入少許消化液。(以液麵蓋住細胞為(wei) 宜)，靜置5～0分鍾。

2．在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變園，相互之間不再連接成片，這時應立即在超淨台中將消化液倒掉，加入3～5ml新鮮培養(yang) 液，吹打，製成細胞懸液。

3．將細胞懸液吸出2ml左右，加到另一個(ge) 培養(yang) 瓶中並向每個(ge) 瓶中分別加3ml左右培養(yang) 液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養(yang) 箱中，繼續進行培養(yang) 。

(三)結果

    一般情況，傳(chuan) 代後的細胞在2小時左右就能附著在培養(yang) 瓶壁上，2～4天就可在瓶內(nei) 形成單層，需要再次進行傳(chuan) 代。