免疫組化實驗中的抗原修複

免疫組化實驗中的抗原修複

、酶消化：如、、蛋白水解酶

2、抗原熱修複：高壓法、微波法、水煮法

*，免疫組化染色中zui關(guan) 鍵的莫過於(yu) 抗原修複，而絕大多數常用抗體(ti) 的修複是通過加熱來完成的，熱抗原修複優(you) 於(yu) 酶消化，更有效，染色結果更易一致，操作單一。

3、修複時間：既要獲得zui強的染色結果，又要保持組織形態的完整性。許多抗原修複存在的問題是組織固定時間過短時，強烈的抗原修複可引起形態破壞、脫片及組織*消化，解決(jue) 的方法可采用較短時間的熱修複或減少酶的消化時間。

4、抗原修複緩衝(chong) 液：有檸檬酸鹽緩衝(chong) 液（pH6.0）、 Tris （pH7-8）、EDTA（pH8.0~9.0） 、 EGTA（pH9.0） 等，檸檬酸鹽緩衝(chong) 液（pH6.0）的優(you) 點是染色背景清晰，適合於(yu) 大多數抗體(ti) ，Tris和 EDTA兩(liang) 種修複液對部分抗原修複效果較強，但其染色背景同時加深，如使用不當易造成假陽性結果的判斷。目前還沒有一種抗原修複液能適合於(yu) 所有的抗體(ti) ，檸檬酸緩衝(chong) 液（pH6.0）可作為(wei) 免疫組化常規使用的抗原修複緩衝(chong) 液，但也不能除外某些抗體(ti) 適用於(yu) EDTA和EGTA緩衝(chong) 修複液，一般抗原比較難於(yu) 表達的抗體(ti) 多選擇高pH值的修複液。例如：ER、PR、Bcl-2、Bcl-6、TdT、Ki-67、Cyclin D等。

5、抗原熱修複注意事項：無論哪一步都不要讓切片幹凅，加熱後需要冷卻5-30分鍾。充分的抗原修複是影響染色結果的*重要因素，加熱的溫度和時間可導致修複不足或過度修複。

6、抗原熱修複對組織中內(nei) 源性的影響：抗原熱修複在增強抗原決(jue) 定簇表達的同時，也增強了組織中內(nei) 源性的反應。采用卵白素-（Avidin-biotin）檢測係統，組織中內(nei) 源性容易出現人為(wei) 假象，在加熱抗原處理條件*相同的陰性對照片中可以觀察到較強的內(nei) 源性的反應，沒有經過熱抗原處理的切片中沒有出現類似的情況。在細胞漿中呈均一的細顆粒狀的淺棕色陽性，有時表達也非常強，與(yu) 真陽性的結果表達很相似，在以往的免疫組化染色中內(nei) 源性的影響對診斷造成許多的誤差，卻常常被忽略。值得提醒的是在概念上一定要十分清楚，陰性對照片必須與(yu) 一抗的抗原修複處理條件*相同，才能準確發現內(nei) 源性出現的部位。

7、內(nei) 源性封閉方法：一般在抗原修複以後，加抗體(ti) 前使用卵白素進行阻斷處理，也可使用非的檢測係統，如：EliVision、EnVision、SuperVesion等。