非標記抗體免疫電鏡操作方法

操作方法

．經典法

（）將被檢病毒材料0.9ml，加︰5～︰0稀釋的特異性免疫血清0.ml充分混合。

（2）置37℃作用h或37℃h後再置4℃過夜。hth体育下载地址

（3）以7 000r/min～23 000r/min離心90min。

（4）吸去上清，將離心管口倒置於(yu) 濾紙上，吸去殘留液體(ti) 。

（5）沉澱物中加少量H2O混懸，用3%磷鎢酸(pH6.0)負染20Sec～30Sec，滴加於(yu) 400目銅網Fomnvar膜上，用濾紙從(cong) 銅網邊緣輕輕吸去多餘(yu) 的負染液。

（6）在透射電鏡下4×04倍觀察。

2．快速法(瓊脂擴散法)

（）同經典法()、(2)步驟，製備免疫複合物。hth体育下载地址

（2）以生理鹽水或pH 7.2緩衝(chong) 液製備%瓊脂糖，趁熱澆注於(yu) 潔淨的載玻片上，每片3ml，待冷卻凝固後，在凝膠麵上等距離放置直徑4mm玻璃珠數粒，再於(yu) 凝膠麵上澆注%瓊脂糖2ml～3ml，冷卻凝固後，取出玻璃珠，使凝膠形成凹孔。

（3）將普通濾紙剪成2×3cm大小，3～4層重疊。用小刀將帶有凹孔的瓊脂糖切成小塊,每塊帶有一個(ge) 凹孔,平放在濾紙上。

（4）在凹孔內(nei) ，加入製備好的含病毒的免疫複合物懸液。

（5）將電鏡載網的Fomnvar膜麵向下倒懸於(yu) 液滴上。由於(yu) 瓊脂糖的吸水作用，20min～30min後，可將液滴的水分吸幹，而濃縮的免疫複合物則粘附在載網膜上。

（6）在載網膜上滴加3%磷鎢酸負染20Sec，過量的負染液用濾紙在載網邊緣輕輕吸去。

（7）於(yu) 透射電鏡4×04倍下觀察。hth体育下载地址

結果判定

直接觀察病毒粒子的形態。由於(yu) 離心濃縮的處理和特異性抗體(ti) 的加入，大大提高了觀察的敏感性。