原位雜交組織化學雙鏈DNA探針和靶DNA變性

  雜交反應是指用雜交液孵育組織切片，雜交液中標記的核酸探針在適當的條件下與(yu) 組織細胞內(nei) 相應的靶核酸互補結合形成雜交體(ti) 的過程。雜交液的成分與(yu) 預雜交液基本相同，所不同的隻是加入標記的核酸探針。hth体育下载地址

    雜交前的準備隻是為(wei) 雜交成功奠定基礎．要獲得滿意的實驗結果，在雜交 反應的實驗過程中還必須注意以下環節。
    雙鏈DNA探針和靶DNA變性

    進行雜交反應時．探針和靶核酸必須均是單鏈，兩(liang) 者方能結合。如果探針和靶核酸均為(wei) 雙鏈或二者中有一者是雙鏈。必須通過變性使其變為(wei) 單鏈。一般通過加熱變性。變性溫度為(wei) 95C，5～5分鍾。探針和(或)靶核酸一旦變性，則需立即進行雜交反應，否則解鏈的核酸又會(hui) 重新複性。如果用單鏈探針檢測靶RNA，一般不需要變性。有時單鏈探針較長，可能會(hui) 在局部形成雙鏈，這時也同樣可通過加熱處理使局部雙鏈解開以利於(yu) 探針和靶核酸之間的結合。hth体育下载地址

    微波爐處理也可使雙鏈DNA探針和靶DNA變性。此法不僅(jin) 能使雙鏈探針和靶核酸有效地變性，而且還能使雜交信號增加。這可能是由於(yu) 微波輻射引起基質蛋白質變性，使靶核酸暴露，也可能是微波輻射對靶核酸構型產(chan) 生直接影響，從(cong) 而提高雜交效率。hth体育下载地址