牛血清在細胞培養中質量檢查方法

檢查方法：
已證明無外源因子汙染的牛細胞培養(yang) 物，在細胞生長液中加5％待測血清，連傳(chuan) 3代共2天。陰性對照細胞培養(yang) 液中加5％已知無病毒汙染的牛血清，與(yu) 試驗組同條件下進行。在觀察期內(nei) 注意細胞形態變化或細胞病變。在觀察期內(nei) 第4天待檢樣品和對照樣品用標準病毒檢測方法檢查。
如待檢細胞培養(yang) 物經消化後分種到6個(ge) 含蓋玻片的容器內(nei) 。陰性對照樣品按同樣方法。再將牛腹泄病毒、牛細小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸弧病毒分別加入待檢培養(yang) 物蓋玻片容器內(nei) 作為(wei) 陽性對照，再培養(yang) 7天，用熒光抗體(ti) 技術進行檢查。
細胞病變或病毒引起的其他改變通過蘇木精或伊紅染色進行觀察。取另外一個(ge) 待檢細胞培養(yang) 瓶用人“O”紅細胞、豚鼠紅細胞和新鮮雞紅細胞作血球吸附病毒檢查。試驗在2～8℃和20～24℃進行。陰性對照細胞預先感染副流感Ⅲ型病毒作為(wei) 陽性對照。未感染的細胞作為(wei) 陰性對照。
3）內(nei) 毒素檢測
用鱟試劑檢查。
4）細菌噬菌體(ti) 檢查
主要檢查E.Coli(C300 or K-2)噬菌體(ti) 。
5）激素含量測定
每批FBS對某些激素含量都要進行測定，包括：雌二醇、胰島素、孕硐、睾丸素、甲狀腺素等。
6）血紅蛋白檢測
血紅蛋白與(yu) 氧合血紅蛋白的比≥70％，血紅蛋白含量≤mg5/dl。
7）細胞生果測定
a.細胞克隆效果測定
細胞選擇：Sp20/Ag-4 或P3X63-Ag8.653
血清濃度與(yu) 細胞數:
0％血清／個(ge) 細胞／孔
4％血清／5個(ge) 細胞／孔
細胞培養(yang) 基RPMI－640， 96孔培養(yang) 盤36℃±2℃，5％二氧化碳培養(yang) 0～5天。試驗中選擇一個(ge) 已知參考牛血清作對照。
克隆效率計算：
克隆效率＝(陽性孔平均數/ 培養(yang) 孔總數) X00％ 
相對克隆效率＝待測血清克隆效率/參考血清克隆效率
b.貼壁效率試驗：
用人的傳(chuan) 代細胞作每批血清的貼壁效率試驗，A549（人肺癌細胞）該細胞可以反應出低濃度血清的貼壁變化。采用6孔培養(yang) 盤每批血清用兩(liang) 種濃度和兩(liang) 種不同的細胞接種數即0％血清――00細胞／孔，4％血清200介細胞／孔。放36℃±2℃，濕潤5％二氧化碳培養(yang) 箱培養(yang) 0～4天，計算著色細胞克隆，確定貼壁效率。從(cong) 這兩(liang) 種不同血清濃度來確立實驗血清支持細胞貼壁生長的水平，分析兩(liang) 種試驗條件下平均貼壁效率。
貼壁效率（％）＝(每孔克隆平均數/ 每孔活存的培養(yang) 細胞平均數) X00％
相對貼壁效率＝被測血清貼壁效率/參考血清貼壁效率
c. 二倍體(ti) 纖維細胞促生長試驗
株    WI28     MRc5
25cm2細胞培養(yang) 瓶，5％血清，每瓶接種.5X05細胞連傳(chuan) 3代，每代血清濃度和接種細胞數相同，每代培養(yang) 7天，每代接種二個(ge) 細胞瓶，36℃±2℃培養(yang) 。以同樣條件用已知參考血清進行平行培養(yang) 。每代收獲細胞計數，計算每批待檢血清與(yu) 參考血清的相對生長率（RGR）。
RGR＝(試驗血清每瓶細胞平均數/ 參考血清每瓶細胞平均數) X00％
牛血清主要質量要求（Sigma）