豬白細胞介素4（IL-4）試劑盒使用原理

豬白細胞介素4（IL-4）試劑盒使用原理

使用目的：
本豬白細胞介素IL-4試劑盒用於(yu) 測定豬血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中白細胞介素 -4（IL-4）含量。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中豬白細胞介素 -4（IL-4）水平。用純化的豬白細胞介素-4（IL-4）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-4（IL-4），再與(yu)  HRP標記的白細胞介素 -4（IL-4）抗體(ti) 結合，形成抗體(ti)  -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 -4（IL-4）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中豬白細胞介素 -4（IL-4）濃度。

標本要求
．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑製辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

操作步驟
.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然後再加待測樣品 0μl（樣品zui終稀釋度為(wei)  5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 3 0分鍾。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋後備用
5.洗滌：豬白細胞介素IL-4小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒後棄去，如此重複 5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色5分鍾.
0.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
.測定：以空白空調零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。