動物細菌學監測標準實驗操作規程內容

動物細菌學監測標準實驗操作規程內(nei) 容

主體(ti) 內(nei) 容：
. 標本的采集
正常動物細菌檢測主要檢查呼吸道和腸道，分別取氣管分泌物及腸內(nei) 容物做細菌培養(yang) 檢查。對於(yu) 發病動物，采取其病變組織和髒器做細菌學檢查。
2. 細菌的培養(yang)
細菌是單細胞的原核生物，絕大部分都可以在人工培養(yang) 基上進行繁殖，隻有少數例外，如泰澤病原體(ti) 需在活細胞中繁殖。不同細菌種類所要求的zui適生長條件不盡相同，有些細菌需在有氧的環境下才能生長，稱為(wei) 需氧菌；有些隻能在無氧環境下生長，稱為(wei) 厭氧菌；還有一些細菌在有氧、無氧環境下都可以生長，稱為(wei) 兼性厭氧菌。
培養(yang) 細菌的目的，是從(cong) 不純的被檢材料中找出特定的細菌或全部細菌，這一過程稱為(wei) 分離培養(yang) 。如果隻是培養(yang) 性質明確的一種細菌，則稱為(wei) 純培養(yang) 。為(wei) 了從(cong) 被檢材料中分離出所要檢查的細菌，可以利用多種性質不同的選擇性培養(yang) 基，檢查各種不同的目的細菌。
（）培養(yang) 基的種類：按物理性狀可把培養(yang) 基分為(wei) 液體(ti) 培養(yang) 基、半固體(ti) 培養(yang) 基和固體(ti) 培養(yang) 基三種。
（2）細菌培養(yang) 的方法：培養(yang) 細菌的目的不同，其方法也不盡相同，通常把細菌的培養(yang) 方法分為(wei) 一般培養(yang) 法、二氧化碳培養(yang) 法和厭氧培養(yang) 法三種：
①一般培養(yang) 法 一般培養(yang) 法又稱需氧培養(yang) 法，將已接種好的平皿、斜麵或液體(ti) 培養(yang) 基等，置於(yu) 37℃孵育箱內(nei) 培養(yang) 8～24h，一般細菌即可於(yu) 培養(yang) 基上生長。但也有少數生長緩慢的細菌，需培養(yang) 2～7d甚至更長時間才能生長。
②二氧化碳培養(yang) 法 某些細菌如腦膜炎奈毖氏菌、布魯杆菌及肺炎支原體(ti) 等，需要在一定的二氧化碳環境下才能良好生長，即二氧化碳培養(yang) 法，常用的有二氧化碳培養(yang) 箱、燭缸法、重碳酸鈉—鹽酸法。
③厭氧培養(yang) 法 有些細菌隻能在無氧環境下生長，即厭氧培養(yang) 法，目前常用的厭氧培養(yang) 法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱等。
3. 細菌的鑒定和分類
把獲得純培養(yang) 的細菌進行一係列生物學特性的檢查，並確定其分類學上的位置，這個(ge) 過程叫細菌鑒定。細菌生物學性狀包括菌落形態、菌體(ti) 形態、染色性質、生化反應以及血清學反應特性和特異性噬菌體(ti) 等。
細菌的分類是根據其營養(yang) 方式及各種生物學特性親(qin) 緣關(guan) 係，將細菌劃分為(wei) 不同的門、綱、目、科、屬、種，其基本分類單位是種。
（）菌落形態：菌落的特征是識別細菌的重要依據，觀察菌落特征時應注意：邊緣是整齊的、還是鋸齒的，表麵是光滑的、還是粗糙的，中間是突起的、還是凹陷的，是透明的、還是半透明或不透明的。如乙型溶血性鏈球菌，在血瓊脂平皿上，菌落灰白色，圓形，稍凸起，透明或半透明，表麵光滑，菌落周圍可見透明的溶血環。而綠膿杆菌，在選擇性培養(yang) 基（NAC）上菌落扁平，邊緣不整齊，大小不一，表麵濕潤、有光澤，菌落周圍有藍綠色或褐色色素擴散，但也有不產(chan) 生色素的菌株。這些菌落特征在細菌的鑒定中均有一定意義(yi) 。
（2）細菌的生化反應特性：各種細菌具有各自*的酶係統，因而在代謝過程中所產(chan) 生的分解與(yu) 合成代謝產(chan) 物也不同。這些代謝產(chan) 物又各具不同的生化特點。根據此特點，利用生物化學方法來鑒別不同細菌，稱為(wei) 細菌的生化反應試驗。生化反應試驗方法很多，主要有以下幾種：
①糖（醇）類發酵試驗：是鑒定細菌的生化反應試驗中zui主要的試驗，不同細菌可發酵不同的糖類，如沙門菌可發酵葡萄糖，但不能發酵乳糖，大腸杆菌則可發酵葡萄糖和乳糖；即使兩(liang) 種細菌均可發酵同一種糖類，其發酵結果也不盡相同，如誌賀菌和大腸杆菌均可發酵葡萄糖，但前者僅(jin) 產(chan) 酸，而後者則產(chan) 酸、產(chan) 氣，故可利用此試驗鑒別細菌。
②葡萄糖代謝類型鑒別試驗：可用於(yu) 葡萄球菌與(yu) 微球菌的鑒別。
③β-半乳糖苷酶試驗（ONPG）：分解乳糖的細菌ONPG試驗為(wei) 陽性，如埃希氏菌屬、枸櫞酸杆菌屬、克雷伯菌屬和沙雷氏菌屬等。而不發酵乳糖的細菌如沙門菌、變形杆菌和腸杆菌科中其他不發酵乳糖的細菌ONPG試驗均為(wei) 陰性。
④其他生化試驗：如澱粉水解試驗、七葉苷水解試驗、甲基紅試驗及VP試驗等。
（3）革蘭(lan) 氏染色法：染色除能觀察細菌形態外，還可根據其染色反應，將細菌分為(wei) 革蘭(lan) 氏陽性和革蘭(lan) 氏陰性菌兩(liang) 大類。如沙門菌屬、誌賀菌屬、巴斯德杆菌及耶爾森菌等均為(wei) 革蘭(lan) 氏陰性菌，革蘭(lan) 氏陽性菌有肺炎鏈球菌、單核細胞增生性李斯特杆菌、金黃色葡萄球菌、鼠棒狀杆菌等。
（4）血清學鑒定：除生化鑒定外，必要時可進行血清學鑒定。如沙門菌屬、誌賀菌屬、綠膿杆菌、耶爾森菌等均可做血清學分型試驗。
根據送檢動物的不同級別，對所需檢查的病原菌進行逐項排查，zui後得出檢測結論。