人可溶性Endoglin試劑盒使用說明

人可溶性Endoglin試劑盒使用說明

本試劑盒僅(jin) 供研究使用。

檢測範圍：96T
.5ng/ml -40 ng/ml

使用目的：
本人可溶性Endoglin試劑盒用於(yu) 測定人血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中可溶性Endoglin（ENG/sCD05）含量。

實驗原理
本試劑盒應用人可溶性Endoglin（ENG/sCD05）水平。用純化的人可溶性Endoglin（ENG/sCD05）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入可溶性Endoglin（ENG/sCD05），再與(yu) HRP標記的可溶性Endoglin（ENG/sCD05）抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性Endoglin（ENG/sCD05）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人可溶性Endoglin（ENG/sCD05）濃度。

人可溶性Endoglin試劑盒組成

標本要求
．人可溶性Endoglin標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：人可溶性Endoglin用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。  
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鍾.
0.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。

操作程序總結：
.準備試劑，樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鍾
3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鍾
4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應0分鍾
5.加入終止液
6.5分鍾之內(nei) 度OD值
7.計算

計算
人可溶性Endoglin以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

注意事項
．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排*加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8．人可溶性Endoglin所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
0.如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。