小鼠甘油三酯試劑盒實驗步驟及事項說明

小鼠甘油三酯試劑盒實驗步驟及事項說明

小鼠甘油三酯試劑盒實驗操作步驟：
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋後的樣品符合試劑盒的檢測範圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 00μl，餘(yu) 孔分別加標準品或待測樣品00μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應20分鍾。為(wei) 保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體(ti) ，甩幹，不用洗滌。每孔加 檢測溶液A工作液 00μl（在使用前一小時內(nei) 配製），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鍾。
3. 小鼠甘油三酯溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板 3次，每次浸泡-2分鍾，大約400μl/每孔，甩幹（也可輕拍將孔內(nei) 液體(ti) 拍幹）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 00μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鍾。
5. 溫育60分鍾後，棄去孔內(nei) 液體(ti) ，甩幹，洗板5次，每次浸泡-2分鍾，350μl/每孔，甩幹（也可輕拍將孔內(nei) 液體(ti) 拍幹）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鍾內(nei) ，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭(lan) 色，後3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與(yu) 底物液的加入順序相同。為(wei) 了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到後應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀(yi) 在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液後立即進行檢測。

小鼠甘油三酯試劑盒實驗應注意的事項：
. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用後請立即按照說明書(shu) 要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉汙染。
2. 加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，*個(ge) 孔與(yu) zui後一個(ge) 孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會(hui) 導致不同的 “預孵育”時間，從(cong) 而明顯地影響到測量值的準確性及重複性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控製在 0分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用多道移液器加樣。
3. 孵育：為(wei) 防止樣品蒸發，試驗時將反應板放於(yu) 鋪有濕布的密閉盒內(nei) ，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體(ti) 蒸發；洗板後應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處於(yu) 幹燥狀態;同時應嚴(yan) 格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍幹，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，避免影響zui後的酶 標儀(yi) 讀數。
5. 小鼠甘油三酯試劑配製：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體(ti) 沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，並使用相應的稀釋液配製，不能混淆。請配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小於(yu) 0μl），以避免由於(yu) 不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重複使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控製：加入底物後請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔0分鍾），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從(cong) 而影響酶標儀(yi) 光密度讀數。
7. 底物：底物請避光保存，在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質含量過高，請先稀釋後再測定，計算時請zui後乘以稀釋倍數。