豚鼠白介素4（IL-4）hth体育下载地址檢測說明書

豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒檢測說明書(shu)

試驗原理：

豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-4濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nei) 進行檢測。先將IL-4和標記的抗體(ti) 同時溫育。洗滌後，加入親(qin) 和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chan) 生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-4的濃度呈比例關(guan) 係。

試劑盒內(nei) 容及其配製：

自備材料：

.  蒸餾水。

2.  加樣器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。

3.  豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒振蕩器及磁力攪拌器等。

樣品收集、處理及保存方法：

、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管。收集血液後，000×g離心0分鍾將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yu) 檢測。000×g離心30分鍾去除顆粒。

3、 細胞上清液……000×g離心0分鍾去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。000×g離心0分鍾，取上清液。

5、 保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項：

●   豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒應按標簽說明書(shu) 儲(chu) 存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟(diu) 棄，不可保存。

●   實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

●   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

●   使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

●   使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。

●   底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。

●   加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

●   按照說明書(shu) 中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

安全性：

.   避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體(ti) ，請盡快用水衝(chong) 洗。

2.   實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3.   豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。

試劑的準備：

.   標準品：標準品的係列稀釋應在實驗時準備，不能儲(chu) 存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2.   洗滌緩衝(chong) 液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

試劑盒性能：

.   靈敏度：zui小的檢測濃度小於(yu) 號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R值為(wei) 0.990。

2.   特異性：不與(yu) 其它細胞因子反應。

3.   重複性：板內(nei) 、板間變異係數均小於(yu) 0%。

操作步驟：

.   豚鼠白介素4（IL-4）ELISA試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chan) 生加樣上的誤差。

2.   根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。

3.   加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的標記的抗體(ti) 。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鍾。

4.   甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.   每孔加入00ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。

6.   甩去孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鍾。避免光照。

8.   取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。

9.   在450nm波長處測定各孔的OD值。