研究解析Hechs染色方法的實驗步驟

研究解析Hechs染色方法的實驗步驟

．貼壁細胞

) 取普通潔淨蓋玻片於(yu) 70%乙醇中浸泡5分鍾或更長時間，無菌超淨台內(nei) 吹幹或用細胞培養(yang) PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養(yang) 液洗滌一遍。將蓋玻片置於(yu) 六孔板內(nei) ，種入細胞培養(yang) 過夜，使約為(wei) 50%-80%滿。

2) 刺激細胞發生凋亡後，吸盡培養(yang) 液，加入0.5ml固定液，固定0分鍾或更長時間（可4℃過夜）。

3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾，吸盡液體(ti) 。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。

4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鍾。也宜用搖床，或手動晃動數次。

5) 用PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾。

6) 滴一滴抗熒光淬滅封片液於(yu) 載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。

7) 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

2. 懸浮細胞

) 離心收集細胞樣品於(yu) .5ml離心管內(nei) ，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定0分鍾或更長時間（可4℃過夜）。

2) 離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾。洗滌期間手動晃動。

3) zui後一次離心後吸去大部分液體(ti) 保留約50ml液體(ti) ，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。

4) 稍晾幹，使細胞貼在載玻片上不易隨液體(ti) 流動。

5) 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鍾。用吸水紙從(cong) 邊緣吸去液體(ti) ，微晾幹。

6) 用PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾。

7) 滴一滴抗熒光淬滅封片液於(yu) 載玻片上，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

8) H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

3. 組織切片

) 常規包埋切片後，脫蠟，透明。

2) PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾，吸盡液體(ti) 。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。可在六孔板中操作。

3) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鍾。也宜用搖床，或手動晃動。

4) 用PBS或0.9%NaCl洗兩(liang) 遍，每次3分鍾。

5) 將切片置於(yu) 載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔淨的蓋玻片，盡量避免氣泡。

6) 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。