組織培養基細胞的一代生存期研究

組織培養基細胞的一代生存期研究

　　所有體(ti) 外培養(yang) 基細胞，包括初代培養(yang) 及各種細胞係，當生長達到一定密度後，都需做傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代的頻率或間隔與(yu) 培養(yang) 液的性質、接種細胞數量和細胞增殖速度等有關(guan) 。接種細胞數量大、細胞基數大、相同增殖速度條件下，細胞數量增加與(yu) 飽和速度相對要快（實際上細胞接種數量大時細胞增殖速度比時要快）。連續細胞係和腫瘤細胞係比初代培養(yang) 細胞增殖快，培養(yang) 液中血清含量多時細胞增殖比少時快。以上情況都會(hui) 縮短傳(chuan) 代時間。

　　細胞傳(chuan) 一代後，一般要經過以下三個(ge) 階段：

　　．潛伏期（Latent Phase）：

　　細胞接種培養(yang) 基後，先經過一個(ge) 在培養(yang) 液中呈懸浮狀態的懸浮期。此時細胞胞質回縮，胞體(ti) 呈圓球形。接著是細胞附著或貼附於(yu) 底物表麵上，稱貼壁，懸浮期結束。各種細胞貼附速度不同，這與(yu) 細胞的種類、培養(yang) 基成分和底物的理化性質等密切相關(guan) 。初代培養(yang) 細胞貼附慢，可長達0～24小時或更多；連續細胞係和惡性細胞係快，0～30分鍾即可貼附。細胞貼附現象是一個(ge) 非常複雜和與(yu) 多種因素相關(guan) 的過程。支持物能影響細胞培養(yang) 基的貼附；底物表麵不潔不利貼附，底物表麵帶有陽性電荷利於(yu) 貼附。另外在貼附過程中，有一些特殊物質如纖維連接素，又稱LETS，細胞表麵蛋白等也參與(yu) 貼附過程。這些物質都是蛋白類成分，它們(men) 有的存在於(yu) 細胞膜的表麵，有的則來自培養(yang) 基中的血清。近年又從(cong) 各種不同組織和生物成分中提取出了很多促貼附物質。貼附是貼附類細胞生長增殖條件之一。

　　細胞培養(yang) 基貼附於(yu) 支持物後，除先經過前述延展過程變成極性細胞，還要經過一個(ge) 潛伏階段，才進入生長和增殖期。細胞處在潛伏期時，可有運動活動，基本無增殖，少見分裂相。細胞潛伏期與(yu) 細胞接種密度、細胞種類和培養(yang) 基性質等密切相關(guan) 。初代培養(yang) 細胞潛伏期長，約24～96小時或更長，連續細胞係和腫瘤細胞潛伏期短，僅(jin) 6～24小時；細胞接種密度大時潛伏期短。當細胞分裂相開始出現並逐漸增多時，標誌細胞已進入指數增生期。

　　2．指數增生期：

　　這是細胞培養(yang) 基增值zui旺盛的階段，細胞分裂相增多。指數增生期細胞分裂相數量可作為(wei) 判定細胞生長旺盛與(yu) 否的一個(ge) 重要標誌。一般以細胞分裂表示，即細胞群中每000個(ge) 細胞中的分裂相數。體(ti) 外培養(yang) 細胞分裂指數受細胞種類、培養(yang) 液成分、pH、培養(yang) 箱溫度等多種因素的影響。一般細胞的分裂指數介於(yu) 0.%～0.5%，初代細胞分裂指數低，連續細胞和腫瘤細胞分裂指數可高達3%～5%。pH和培養(yang) 液血清含量變動對細胞培養(yang) 基分裂指數有很大影響。指數增生期是細胞一代中活力的時期，因此是進行各種實驗的和zui主要的階段。在接種細胞數量適宜情況下，指數增生期持續3～5天後，隨細胞數量不斷增多、生長空間漸趨減少、zui後細胞相互接觸匯合成片。細胞培養(yang) 基相互接觸後，如培養(yang) 的是正常細胞，由於(yu) 細胞的相互接觸能抑製細胞的運動，這種現象稱接觸抑製。而惡性細胞則無接觸抑製現象，因此接觸抑製可作為(wei) 區別正常與(yu) 癌細胞標誌之一。腫瘤細胞由於(yu) 無接觸抑製能繼續移動和增殖，導致細胞向三維空間擴展，使細胞發生堆積。細胞接觸匯合成片後，雖發生接觸抑製，隻要營養(yang) 充分，細胞仍然能夠進行增殖分裂，因此細胞數量仍在增多。但當細胞密度進一步增大，培養(yang) 基液中營養(yang) 成分減少，代謝產(chan) 物增多時，細胞因營養(yang) 的枯竭和代謝物的影響，則發生密度抑製，導致細胞分裂停止。因此細胞接觸抑製和密度抑製是兩(liang) 個(ge) 不同的概念，不應混淆。

　　3．停滯期：

　　細胞數量達飽和密度後，細胞培養(yang) 基遂停止增殖，進入停滯期。此時細胞數量不再增加，故也稱平頂期。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yang) 液中營養(yang) 漸趨耗盡，代謝產(chan) 物積累、pH降低。此時需做分離培養(yang) 即傳(chuan) 代，否則細胞會(hui) 中毒，發生形態改變，重則從(cong) 底物脫落死亡，故傳(chuan) 代應越早越好。傳(chuan) 代過晚（已有中毒跡象）能影響下一代細胞的機能狀態。在這種情況下，雖進行了傳(chuan) 代，因細胞已受損，需要恢複，至少還要再傳(chuan) ～2兩(liang) 代，通過換液淘汰掉死細胞和使受損輕微的細胞培養(yang) 基得以恢複後，才能再用。結果反而耽誤了時間，這是在實驗中應特別注意的。