培養基介紹細胞複蘇需要注意的事項

培養基介紹細胞複蘇需要注意的事項

　　. 培養(yang) 基取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為(wei) 重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。

　　2. 凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這裏不作詳述，但二甲基亞(ya) 碸（DMSO）對細胞不是*無毒副作用，在常溫下，二甲基亞(ya) 碸對細胞的毒副作較大，因此，必須在-2min內(nei) 使凍存液*融化。如果複蘇溫度太慢，會(hui) 造成細胞的損傷(shang) ，二甲基亞(ya) 碸（DMSO）選擇進口產(chan) 品。

　　3. 離心前須加入少量培養(yang) 液。細胞解凍後二甲基亞(ya) 碸濃度較高，注意加入少量培養(yang) 液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷(shang) 。

　　4. 離心問題：目前主要有兩(liang) 種見解。一種是解凍後的細胞培養(yang) 基懸液直接吹打均勻後分裝到培養(yang) 瓶中進行培養(yang) ，第二天換液。因為(wei) 離心的目的是兩(liang) 個(ge) ，去除DMSO，去除死細胞，這個(ge) 是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會(hui) 受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易汙染，所以不。另一種說法為(wei) 細胞懸液中含有二甲基亞(ya) 碸（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心後的液體(ti) 前倒淨，且一定倒幹淨。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行複蘇，結果無有異常。

　　5. 細胞貼壁少的問題：教科書(shu) 中說明凍存細胞解凍時ml細胞液要加0ml－5m培養(yang) 液，而在我的試驗中的經驗總結為(wei) 培養(yang) 基越少細胞越容易貼附。

　　6. 複蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為(wei) 複蘇管細胞一般可分裝到-2隻培養(yang) 瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利於(yu) 細胞的貼壁。

　　7. 加培養(yang) 基的量放入問題：這個(ge) 量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從(cong) 如果你加培養(yang) 基的太少，那麽(me) DMSO的濃度就會(hui) 比較大，就會(hui) 影響細胞生長，從(cong) 以前的資料來看，DMSO的濃度在小於(yu) 0.5%的時候對一般細胞沒有什麽(me) 影響，還有一個(ge) 說法是％。所以如果你的凍存液的濃度是0％DMSO的話那麽(me) 加0ml以上的培養(yang) 基就恰好稀釋到了無害濃度。