培養基成纖維細胞的排除方法研究

培養基成纖維細胞的排除方法研究

．培養(yang) 基機械刮除法：

　　是用不鏽鋼絲(si) 末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不鏽鋼絲(si) ）、或裹少許脫脂棉製成，裝入試管中高壓滅菌後備用（也可用特製電熱燒灼器刮除）。刮除程序為(wei) ：

　　（）標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yang) 瓶皿的背麵圈下生長腫瘤細胞的部位；

　　（2）刮除：棄掉培養(yang) 液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間；

　　（3）用Hanks液衝(chong) 洗一兩(liang) 次，洗除被刮掉的細胞；

　　（4）注入培養(yang) 液繼續培養(yang) ，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重複刮除至*除掉為(wei) 止

2．反複貼壁法：

　　根據腫瘤細胞比成纖維細胞培養(yang) 基貼壁速度慢的特點，並結合使用不加血清的營養(yang) 液，把含有兩(liang) 類細胞的細胞懸液反複貼壁，使兩(liang) 類細胞相互分離，操作方法與(yu) 傳(chuan) 代相同。

　　（）待細胞生長達一定數量後，倒出舊培養(yang) 液，用消化後，Hanks 衝(chong) 洗2次，加入不含血清的培養(yang) 液，吹打製成細胞懸液；

　　（2）取編號為(wei) 此A、B、C三個(ge) 培養(yang) 瓶；首先把懸液接種入A培養(yang) 瓶中。置溫箱中靜止培養(yang) 5～20分鍾後，輕輕傾(qing) 斜培養(yang) 瓶，讓液體(ti) 集中瓶角後慢慢吸出全部培養(yang) 液，再接種入B培養(yang) 瓶中後；向A瓶中補充少許*培養(yang) 液置溫箱中繼續培養(yang) ；

　　（3）培養(yang) B瓶中細胞5～20分鍾後，接處理A的方法，把培養(yang) 液注入C培養(yang) 瓶中；再向B瓶中補加*培養(yang) 基。

　　當三個(ge) 瓶內(nei) 都含有培養(yang) 液後，均在溫箱中繼續培養(yang) 。如操作成功，次日觀察可見A瓶主要為(wei) 成纖維細胞，B瓶兩(liang) 類細胞相雜，C瓶可能主要為(wei) 癌細胞。必要時可反複處理多次，直至癌細胞純化為(wei) 止。

3．消化排除法：

　　此法曾用於(yu) 乳癌細胞的培養(yang) ，具體(ti) 程序是：

　　（）先是用0.5%和0.02％EDTA（：）混合液漂洗培養(yang) 細胞一次，然後再換成新的混合液繼續消化，並在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養(yang) 瓶，到半數細胞脫落下來後，便立即停止消化；

　　（2）把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養(yang) 液置溫箱中培養(yang) ；向原瓶內(nei) 也補加新的培養(yang) 液繼續培養(yang) 。用此法處理後，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經過幾次反複處理，可能把成纖維細胞除淨。

4．膠原酶消化法：

　　本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為(wei) 敏感的特點，通過消化進行選擇。

　　（）可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉後，即終止消化；

　　（2）用Hanks洗滌處理一次後，更換新培養(yang) 液，繼續培養(yang) ，可獲純淨腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除淨，可再次重複。

5．其它方法：

　　有人發現聚丙烯酰胺有抑製成纖維細胞培養(yang) 基基生長的作用；也有人用聚蔗糖製備成比重.025～.085的密度梯度離心液，加入細胞懸液後，在23℃中800g離心0分種。在比重.025～.050層為(wei) 成纖維細胞，在比重.050～.085層為(wei) 上皮細胞，再經過分離進行培養(yang) 。zui近也有人應用特殊化學物如SOD抑製成纖維細胞生長的方法。