蛋白腖細胞培養基基本配方構成及血清在其中的地位

蛋白腖細胞培養(yang) 基基本配方構成及血清在其中的地位

無血清蛋白腖培養(yang) 基的基本配方：基本成分為(wei) 基礎培養(yang) 基及添加組分兩(liang) 大部分。

　　用於(yu) 生物製藥和疫苗生產(chan) 的細胞在體(ti) 外培養(yang) 時，多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長；而當其在無血清、無蛋白培養(yang) 基中生長時，由於(yu) 缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細胞往往以懸浮形式生長。

　　添加組分包括以下幾大類物質

　　()促貼壁物質：許多細胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養(yang) 基中一定要添加促貼壁和擴展因子，一般為(wei) 細胞外基質，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們(men) 還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與(yu) 分化，這些細胞培養(yang) 基包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。

　　(2)促生長因子及激素：針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質，有些激素是許多細胞*的，如胰島素。

　　(3)酶抑製劑：培養(yang) 貼壁生長的細胞，需要用消化傳(chuan) 代，在無血清培養(yang) 基中*須含酶抑製劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。zui常用的是大豆；抑製劑。

　　(4)結合蛋白腖和轉運蛋白：常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養(yang) 基的粘度，保護細胞免受機械損傷(shang) 。許多旋轉式培養(yang) 的無血清培養(yang) 基都含有牛血清白蛋白。

　　(5)微量元素：硒是zui常見的。

    目前，血清仍是動物蛋白腖細胞培養(yang) 中zui基本的的添加物，尤其是在原代培養(yang) 或者細胞生長狀況不良時，常常會(hui) 先使用有血清的培養(yang) 液進行培養(yang) ，待細胞生長旺盛以後，再換成無血清培養(yang) 液。細胞轉入無血清培養(yang) 基培養(yang) 要有一個(ge) 適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從(cong) 0%減少到5%，3%，%，直至無血清培養(yang) 。

　　在降低過程中要注意觀察細胞培養(yang) 基形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗後這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠培養(yang) 於(yu) 無血清培養(yang) 基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養(yang) 之前，要留有種子細胞，種子細胞按常規培養(yang) 於(yu) 含血清的培養(yang) 基中，以保證細胞的特性不發生變化。

　　為(wei) 了使細胞適應無血清培養(yang) ，關(guan) 鍵的是使所培養(yang) 細胞：、處於(yu) 對數生長中期，2、大於(yu) 90% 活細胞率，3、適應時以較高的起始細胞接種。