穀研試劑-酶聯接免疫吸附劑測定[ELISA]的原理和類型

酶聯接免疫吸附劑測定[ELISA]的原理和類型
摘要：
.. ELISA的原理 ELISA的基礎是抗原或抗體(ti) 的固相化及抗原或抗體(ti) 的酶標記。結合在固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體(ti) 既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體(ti) 或抗原）與(yu) 固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 起反應。用洗滌的方法使固相載體(ti) 上形成的抗原抗體(ti) 複合物與(yu) 液體(ti) 中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗

相關(guan) 專(zhuan) 題ELISA免疫實驗技術
.. elisa的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體(ti) 的固相化及抗原或抗體(ti) 的酶標記。結合在固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體(ti) 既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體(ti) 或抗原)與(yu) 固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 起反應。用洗滌的方法使固相載體(ti) 上形成的抗原抗體(ti) 複合物與(yu) 液體(ti) 中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體(ti) ，也通過反應而結合在固相載體(ti) 上。此時固相上的酶量與(yu) 標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為(wei) 有色產(chan) 物，產(chan) 物的量與(yu) 標本中受檢物質的量直接相關(guan) ，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於(yu) 酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
.2. ELISA的類型
ELISA可用於(yu) 測定抗原，也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。在這種測定方法中有三個(ge) 必要的試劑：()固相的抗原或抗體(ti) ，即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體(ti) ，稱為(wei) “酶聯物”、“結合物”(conjugate);(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體(ti) 條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。用於(yu) 臨(lin) 床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：
.2. 雙抗體(ti) 夾心法測抗原
酶聯接免疫吸附劑測定[ELISA]的原理和類型
雙抗體(ti) 夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
) 將特異性抗體(ti) 與(yu) 固相載體(ti) 聯結，形成固相抗體(ti) 。洗滌除去未結合的抗體(ti) 及雜質。
2) 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與(yu) 固相抗體(ti) 結合，形成固相抗原抗體(ti) 複合物。洗滌除去其他未結合物質。
3) 加酶標抗體(ti) ，保溫反應。固相免疫複合物上的抗原與(yu) 酶標抗體(ti) 結合。*洗滌未結合的酶標抗體(ti) 。此時固相載體(ti) 上帶有的酶量與(yu) 標本中受檢抗原的量相關(guan) 。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為(wei) 有色產(chan) 物。通過比色，測知標本中抗原的量。
在臨(lin) 床檢驗中，此法適用於(yu) 檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。隻要獲得針對受檢抗原的異性抗體(ti) ，就可用於(yu) 包被固相載體(ti) 和製備酶結合物而建立此法。如抗體(ti) 的來源為(wei) 抗血清，包被和酶標用的抗體(ti) 分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體(ti) ，一般選擇兩(liang) 個(ge) 針對抗原上不同決(jue) 定簇的單抗，分別用於(yu) 包被固相載體(ti) 和製備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體(ti) 一起保溫反應，作一步法檢測。