穀研試劑-縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤免疫組化和DNA倍體研究

穀研試劑-縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤免疫組化和DNA倍體(ti) 研究

摘要　目的：研究縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤的臨(lin) 床病理、免疫組化及DNA倍體(ti) 的表現。方法：采用常規石蠟切片、HE染色及免疫組化染色ABC法。另對6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，應用細胞影像儀(yi) 對腫瘤細胞核的DNA倍體(ti) 進行測定。結果：腫瘤細胞特點為(wei) 瘤細胞較大，呈彌漫分布，其間可見寬窄不一、成束或帶狀的纖維結締組織穿插分割。免疫組化染色瘤細胞表達LCA及L26陽性，IgA及κ弱陽性。經細胞影像儀(yi) 測定瘤細胞DNA呈高異倍體(ti) ，DNA質量的分布呈高度異質性。結論：來源於(yu) 胸腺B淋巴細胞。腫瘤細胞DNA倍體(ti) 測定結果對於(yu) 患者預後的判斷可能具有非常重要的意義(yi) 。
關(guan) 鍵詞　縱隔腫瘤；淋巴瘤；DNA倍體(ti) ；免疫組織化學
中國圖書(shu) 分類號　R734.5； R733.4　　文獻標識碼　A　　文章編號　00-7399（999）0-002-03

Immunohistochemistry ａnd DNA ploidy of primary large B cell lymphoma in mediastina

Lü Xiang, Meng Fanqing, Zhou Siqiao et al
(Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing Univerisity Medical School, Nanjing　20008)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the characteristics of clinicopathology, immunohistochemistry ａnd the DNA ploidy measurement for the primary large B cell lymphoma in mediastina. Methods　The routine paraffin slides were cut ａnd stained with HE as well as ABC immunohistochemical technique. In addition, the 6 μm thick paraffin slides were cut ａnd stained by Feulgen method. Then the DNA ploidy of tumor cells were measured with image cytometer. Results　The morphological characteristics of tumor cells were that the sheets of diffusely distributed large lymphocytes were penetrated by bundles of fibroconnective tissue. In immunohistochemically stained slides, the tumor cells were LCA ａnd L26 positive, IgA ａnd κ weakly positive. The DNA ploidy measurement results showed that the tumor cells were high aneuploidy ａnd the distribution of DNA contents were highly heterogeneous. Conclusion　The neoplasm may originate from the B lymphocyte in thymus. The result of the DNA ploidy measurement of the tumor cells suggests that it might have very great significance for the prediction of the prognosis of the patient.
KEY WORDS　mediastina; lymphoma; DNA ploidy; immunohistochemistry

縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤罕見，國內(nei) 鮮有報道。我們(men) 對例縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤進行了臨(lin) 床病理、免疫組化及DNA定量測定的研究，現報道如下。

　材料和方法

標本采用0%甲醛固定，常規石蠟切片，HE染色及Giemsa染色，光鏡觀察，並對石蠟切片采用ABC法進行免疫組化染色。所采用的單克隆抗體(ti) 由Dako公司提供。另對6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，以腫瘤周圍殘存的正常胸腺淋巴細胞作為(wei) 內(nei) 對照，用細胞影像儀(yi) 對腫瘤細胞的倍體(ti) 進行測定，測定時采用的光源波長為(wei) 560 nm。

2　結果

2.　臨(lin) 床資料　患者男，35歲，漸起幹咳3周。體(ti) 檢：頸靜脈怒張，全身淺表淋巴結、肝、脾不腫大。骨髓穿刺檢查未見異常。胸片顯示上縱隔增寬，見向兩(liang) 側(ce) 突起密度均勻的陰影。側(ce) 位片見腫瘤位於(yu) 前上縱隔。CT檢查見：前上縱隔腫塊大小5.5 cm×5 cm×5 cm，與(yu) 周圍組織境界模糊。手術中見腫瘤位於(yu) 胸腺部位，表麵灰白色，高低不平，質硬，與(yu) 周圍組織分界不清，廣泛浸潤周圍組織和胸骨。上腔靜脈亦被包裹在腫瘤組織內(nei) ，肺組織未見浸潤。
2.2　病理檢查　肉眼見送檢腫瘤組織3塊，大者3.6 cm×2 cm×.5 cm，小者 cm× cm× cm。表麵粗糙高低不平，灰白色，切麵灰白色，質硬。鏡下見：腫瘤細胞呈彌漫散在分布。腫瘤內(nei) 見可見寬窄不一、束狀、玻璃樣變性的纖維組織穿插於(yu) 瘤細胞之間把瘤組織分割成不規則片塊狀。瘤細胞較大，大小形態較一致。細胞核大，呈圓形、卵圓形及略不規則形，核膜清晰。核染色質呈粗顆粒狀，核可見嗜酸性小核仁。核分裂象個(ge) /0HPF。瘤細胞胞漿較豐(feng) 富，淡伊紅色，細胞境界不清。瘤細胞間可見少數不規則分布的小血管。Giemsa染色瘤細胞漿呈紫藍色，胞漿內(nei) 未見顆粒。腫瘤內(nei) 可見大片壞死，在腫瘤的邊緣可見瘤細胞浸潤周圍脂肪結締組織，並可見少量萎縮的胸腺組織。
2.3　免疫組化　瘤細胞表達LCA陽性、L26陽性、IgA及κ弱陽性。瘤細胞表達IgM、IgG、λ、UCHL、Mac387、cytokeratin、vimentin及p53陰性。
2.4　腫瘤細胞DNA定量測定　腫瘤細胞呈高異倍體(ti) ，DNA質量的分布呈高度異質性。瘤細胞DNA質量主峰值為(wei) 7.95 pg，DNA指數為(wei) 2.50，變異係數0.22；瘤細胞DNA質量次峰值為(wei) 9.68 pg，DNA指數為(wei) .35，變異係數為(wei) 0.55。

3　討論

縱隔內(nei) 原發性淋巴瘤罕見，其大多數為(wei) 淋巴母細胞型淋巴瘤〔〕，而原發性大B細胞性淋巴瘤則極少見。其臨(lin) 床特點為(wei) ：患者以年輕女性多見〔2〕，發病年齡23～75歲，平均33歲〔〕。患者可有咳嗽、胸痛、呼吸困難以及靜脈阻塞綜合征等。腫瘤位於(yu) 前縱隔，並傾(qing) 向於(yu) 浸潤周圍組織。本例臨(lin) 床表現及生物學行為(wei) 特點均與(yu) 文獻報道一致。
本例腫瘤在光鏡下zui顯著的特點為(wei) ：瘤細胞較大，形態一致，呈彌漫散在分布，瘤細胞間常有寬窄不一、硬化的纖維組織束帶穿插分割。細胞核呈圓形、卵圓形及不規則形，核仁圓而清楚，細胞漿較豐(feng) 富，弱嗜堿性。腫瘤內(nei) 常見壞死，核分裂象可達～4個(ge) /HPF。Kurita等〔3〕報道腫瘤印片May-Giemsa染色在大多數瘤細胞胞漿內(nei) 可見嗜苯胺藍顆粒。電鏡下的特點為(wei) 瘤細胞胞漿豐(feng) 富，含有一些線粒體(ti) 、核糖體(ti) 和少量粗麵內(nei) 質網。大多數瘤細胞胞漿內(nei) 含中等大小的(直徑<0.7 μm)有膜包裹的電子致密顆粒。在一些細胞內(nei) 可見較大的有膜包裹的電子透明顆粒。由於(yu) 其電子致密顆粒形態類似於(yu) 大顆粒淋巴細胞及大顆粒淋巴細胞白血病/淋巴瘤細胞內(nei) 的溶酶體(ti) ，故Kurita認為(wei) 嗜苯胺藍顆粒可能來源於(yu) 溶酶體(ti) 。
關(guan) 於(yu) 該腫瘤的起源，目前多認為(wei) 其可能來源於(yu) 胸腺內(nei) B淋巴細胞〔2，3〕。胸腺髓質內(nei) B淋巴細胞可陽性表達所有B淋巴細胞標記，並可表達IgM、IgD陽性，偶而IgA陽性，但IgG陰性。Kurita等的病例瘤細胞表達CD20、CD22、CD23、CD24、OKDR和PCA陽性，CD9和CD20陰性，說明其來源於(yu) 胸腺B淋巴細胞。文獻報道由於(yu) 瘤細胞可表達漿細胞抗原標記PC和PCA陽性，提示其為(wei) 向B細胞分化的終末細胞〔2，3〕。本例腫瘤位於(yu) 胸腺部位，周圍可見殘留的胸腺組織，免疫組化染色瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性，支持其起源於(yu) 胸腺B淋巴細胞。
鑒別診斷：()霍奇金病：其雖以女性青年多見且多為(wei) 結節硬化型，但其有典型的雙核R-S細胞及其它各型R-S細胞，背景細胞多樣化，有較多的反應性淋巴細胞及組織細胞，免疫組化染色瘤細胞表達Leu-M及Ki-陽性。本例腫瘤細胞形態較單一，不見以診斷性R-S細胞為(wei) 代表的係列腫瘤細胞。瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性。(2)胸腺瘤：有上皮細胞及淋巴細胞兩(liang) 種細胞成分，上皮性細胞形態多樣，可呈梭形，瘤細胞可表達keratin、Leu-7和CEA陽性及thymulin和thymosin α陽性。本例腫瘤隻見單一細胞成分，不見梭形細胞，瘤細胞呈彌漫散在分布，無排列成巢的趨勢，瘤細胞表達上皮性標記陰性。(3)精原細胞瘤：其好發於(yu) 男性，男女之比5∶。瘤細胞胞境界清楚，核仁大而明顯，可排列成小巢狀或不規則腺泡狀及梁索狀，間質內(nei) 淋巴細胞浸潤較明顯，可見上皮樣肉芽腫，瘤細胞表達胎盤堿性磷酸酶、Leu-7陽性。本例腫瘤則以女性多見，瘤細胞呈彌漫散在分布，核仁較小而細胞境界不清，瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性。(4)間變性大細胞淋巴瘤：70%的間變性大細胞淋巴瘤可累及縱隔〔4〕，其腫瘤細胞形態多樣化，常有花冠狀多核巨細胞、胚胎樣巨核細胞，瘤細胞表達CD30(Ki-或HerH2)陽性。本例腫瘤形態較單一，不見花冠狀巨核細胞和胚胎樣巨核細胞，瘤細胞表達CD30(Ki-或HerH2)陰性。
本例腫瘤細胞DNA呈高異倍體(ti) ，DNA質量的分布呈高度異質性。DNA質量主峰值為(wei) 7.95 pg，DNA指數為(wei) 2.50，次峰值為(wei) 9.68 pg， DNA指數為(wei) .35，手術時見腫瘤在縱隔內(nei) 廣泛浸潤性生長並浸潤胸骨，反映了腫瘤細胞呈高度惡性。文獻亦報道該腫瘤預後差〔〕，大多數病例抗腫瘤治療效果不佳。患者存活時間4～22個(ge) 月，平均僅(jin) 存活6個(ge) 月〔2〕。該腫瘤的治療以為(wei) 主，Lavabre-Bertrand等認為(wei) ，盡管在開始階段就應對腫瘤進行積極的，然而放射治療或手術治療亦屬必要，因為(wei) 腫瘤可較長時間內(nei) 僅(jin) 局部發展〔〕。