有關細胞和組織學技術

　　有關(guan) 細胞和組織學技術

免疫組織化學技術是用標記物或顯色物標記的抗體(ti) 檢測細胞和組織內(nei) 的抗原，從(cong) 而達到診斷和研究疾病的目的。抗原的準確顯示和定位與(yu) 製備的細胞和組織標本質量的好壞有著密切的。由於(yu) 各種抗原的生化、物理性質不同，如溫度高低、酸堿度強弱及各種化學試劑的作用均可影響抗原的免疫學活性，良好的細胞和組織學結構將有助於(yu) 抗原的準確定位。因此，細胞和組織標本的采集製備在免疫組織化學技術中占有十分重要的位置。

　　（一）細胞標本的取材

　　目前，免疫組化技術已經應用於(yu) 細胞學診斷，如鑒別低分化癌與(yu) 惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應用於(yu) 胸腹水中間皮瘤與(yu) 癌的鑒別。McAb應用於(yu) 淋巴白血病和惡性淋巴瘤的分類分型。近年來，培養(yang) 細胞的免疫組化技術在鑒定細胞的種類、分化程度、表麵抗原特點以及腫瘤結構成分改變等方麵的研究均起到了積極作用。

　　細胞標本的取材有以下3種方法:

　　．印片法　　主要應用於(yu) 活組織檢查標本和手術切除標本。新鮮標本以zui大麵積剖開，充分暴露病變區，將載玻片輕輕壓於(yu) 病變區，脫落的細胞便粘附在玻片上，立即浸入細胞固定液內(nei) 5-0min，取出後自然幹燥，低溫保存備用。

　　優(you) 點是簡便省時，細胞抗原保存較好。缺點是細胞分布不均勻，玻片上細胞重疊，影響標記效果。

　　2．穿刺吸取塗片法　　主要應用於(yu) 實質器官的病變區，如肝、腎、肺、淋巴結、軟組織等。用細針穿刺吸取病變區內(nei) 液體(ti) 成分，如穿刺液較少，可直接塗抹在載玻片上，力求細胞分布均勻。如穿刺液較多，細胞豐(feng) 富，可用洗滌法：將穿刺液滴入盛有-2ml Hanks液（RPMi 640液）的試管內(nei) ，輕輕攪拌，以500rpm低速離心5-0min後，棄上清液，將沉澱製成細胞懸液（濃度約2×06細胞/ml），吸取滴於(yu) 載玻片上，輕輕塗抹，待塗片略幹即可固定。

　　該法穿刺吸取直接塗片的優(you) 點是操作簡便，細胞形態保持較好。缺點是細胞分布不均勻。洗塗法片雖可彌補這一缺點，但操作複雜，細胞常常發生變形。

　　3．體(ti) 液沉澱塗片法　　主要用於(yu) 胸水、腹水、尿液、腦脊液等體(ti) 液多、細胞少的標本。體(ti) 液采取後，必須及時處理，更不宜加固定液。根據標本內(nei) 細胞數量的多少選用不同的處理方法：①細胞數量極多者，可吸取少量液體(ti) 直接塗在玻片上。②細胞數量較少者，可將液體(ti) 自然沉澱，然後吸取5ml左右沉澱液，以500rpm離心0min，棄上清液，將沉澱塗片，略幹後固定備用。

　　如用細胞離心塗片器（Cytospin ），可將標本用上述離心沉澱法製成2×06細胞/ml的細胞懸液，吸取50μl加入塗片器內(nei) ，離心後即製成分布均勻的細胞塗片，細胞分布在直徑約6mm的小圓圈內(nei) ，每個(ge) 圓圈內(nei) 的細胞數約05個(ge) （Danos,976）。

　　培養(yang) 細胞標本的取材可根據培養(yang) 的細胞特性分別采取不同的方法。某些細胞有貼壁生長的特性，如纖維母細胞、粘液癌細胞等，隻需將載玻片或蓋玻片插入培養(yang) 液內(nei) 即可收集到理想的細胞標本。某些細胞隻能在培養(yang) 液中生長，可用上述體(ti) 液沉澱離心塗片法處理。

　　製備細胞塗片應注意：①標本反複離心洗滌，細胞的粘附性降低，在免疫組化染色過程中容易脫片，因此，在製備塗片前載玻片上應塗粘附劑。②為(wei) 節　省試劑和便於(yu) 鏡下觀察和記數，應將細胞集中到直徑0.6-.0cm的圓圈內(nei) ，細胞總數以05個(ge) 為(wei) 宜。③粘液豐(feng) 富的標本，如痰液，胃液等，未經特殊處理，一般不宜作免疫組化標記。

　　（二）組織標本的取材

　　組織標本主要取之於(yu) 活組織檢查標本、手術切除標本、動物模型標本以及屍體(ti) 解剖標本等。前三者均為(wei) 新鮮組織，後者是機體(ti) 死亡2h以上的組織，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有變性消失，嚴(yan) 重彌散現象，因此，屍檢組織應盡快固定處理，以免影響免疫組化標記效果。但有些較穩定性抗原，如HBsAg、HBcAg等在屍檢標本中，抗原顯示仍較好。

　　組織標本的取材常常受到各種因素的影響，如各種內(nei) 窺鏡鉗取的組織，常因過度擠壓而變形，嚴(yan) 重者組織結構被破壞。大組織標本病變分布廣泛，抗原在組織中分布不均一，常出現人為(wei) 的組織取材不準確。為(wei) 了避免上述缺點，組織取材時應注意：①活檢鉗的刃口必須鋒利，以免組織受擠壓；②取材部位必須是主要病變區；③必須取病灶與(yu) 正常組織交界區；④必要時取遠距病灶區的正常組織作對照。

　　為(wei) 充分保存組織的抗原性，標本離體(ti) 後慶立即作處理，或立即速凍成凍塊進行冰凍切片，或立即用固定液固定進行脫水、浸蠟、包埋、石蠟切片。如不能迅速製片，可貯存於(yu) 液氮罐內(nei) 或-70。C冰箱內(nei) 備用。

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