重組蛋白質生產實驗步驟

重組蛋白質生產(chan) 實驗步驟

1.  在懸浮培養(yang) 液中培養(yang) Sf9細胞，並使之適應無血清培養(yang) 液。

2.  準備旋轉培養(yang) 瓶，用於(yu) 按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩(liang) 孔蓋連接在轉瓶的一個(ge) 側(ce) 臂，另用一平蓋接在另一側(ce) 臂。將一段短管（約6英寸或15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器，借助張力器用管索將管子與(yu) 通氣孔和濾器固牢。

3.  將一段長管（30~60 cm）連接至進氣孔，並在末端連接一濾器，用管索加固，另一段管子連接於(yu) 濾器的另一端，用管索固牢。管子末端用鋁箔封好。

4.  將與(yu) 兩(liang) 孔裝置相對的側(ce) 壁上的蓋子旋轉90度以鬆開，高壓滅菌培養(yang) 瓶1 h。

5.  將適應了無血清培養(yang) 液的細胞接種於(yu) 經高壓滅菌的培養(yang) 瓶中。將培養(yang) 瓶裝至半滿至全滿之間，加入足夠的無血清培養(yang) 液以使細胞終密度達到5×105~6×105細胞/ml 至1.5×106細胞/ml。

6.  將培養(yang) 瓶放在27℃培養(yang) 箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設置在80 r/min。從(cong) 進 氣管的末端移去鋁箔，並將它連接到供氣泵。接通泵的電源，使其流量達到500~700 ml/min。

7.  細胞生長至密度約1.5×106細胞/ml。在層流室中將感染複數（MOI）為(wei) 1~2的病毒通過側(ce) 臂直接加到培養(yang) 瓶中。 

8.  於(yu) 27℃將培養(yang) 瓶置於(yu) 磁力振蕩器上並通氣，確定溫育培養(yang) 物的時間。 

9.  處理上清得到分泌蛋白或處理細胞得到胞內(nei) 蛋白。重組蛋白質生產(chan) 實驗步驟