基因組DNA去汙劑實驗步驟

基因組DNA去汙劑實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液於(yu) 65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲(si) 體(ti) (液體(ti) 培養(yang) 獲得的菌絲(si) 用真空抽濾即可！固體(ti) 培養(yang) 就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體(ti) 積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體(ti) 積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體(ti) 積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉澱

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩(liang) 次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體(ti) 積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉澱30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉澱用70%酒精漂洗一次,幹燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

本品采用非酶法清除RNA樣品中的基因組DNA汙染。每ml試劑處理～100μg RNA樣品。很多用戶在提取RNA的時候由於(yu) 操作因素或者RNA抽提試劑質量問題，造成所得到的RNA樣品中混雜基因組汙染，在普通或者變性電泳的時候直接肉眼可見程度不一的DNA汙染雜帶。即使用市售的RNase-free的DNase消化DNA也不容易清除完全，而且常常導致RNA降解。本品不含DNA酶，在烈抑製RNA酶的條件下徹底清除RNA樣品中的汙染DNA雜帶和蛋白質汙染，同時進一步純化RNA。後通過異丙醇沉澱回收的RNA純度極高，完全不影響原有RNA質量和下遊應用。