玉米T25PCR檢測試劑盒使用方法

玉米T25PCR檢測試劑盒使用方法:

一、樣品 DNA 的製備

用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決(jue) 定檢測靈敏度的關(guan) 鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體(ti) 檢測靈敏度。

二、製備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度為(wei) 例。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 病毒做陽性對照，隻提供沒有傳(chuan) 染性的、可以直接使用的 DN**段作為(wei) 陽性對照。

1. 標記 6 個(ge) 離心管，分別為(wei) 6，5，4，3，2 和 1 號。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

3. 產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝(chong) 液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。

4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鍾，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。

5. 換槍頭，從(cong) 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鍾，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。

6. 換槍頭，從(cong) 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重複上麵的操作直到得到 6個(ge) 稀釋度的陽性對照。7. NC 管中不加任何陽性對照。

8. 從(cong) 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個(ge) 樣品做 3 次重複。PCR 後得到每個(ge) 陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，並以之為(wei) 縱軸，以濃度的對數值為(wei) 橫軸，繪製標準曲線。