內(nei) 皮素hth体育下载地址采用的是雙抗體(ti) 夾心法酶聯免疫吸附檢測技術(ELISA)。測定樣品中人內(nei) 皮素1水平。向預先包被了抗人內(nei) 皮素1抗體(ti) 的酶標孔中,加入標準品和樣本,溫育後,加入生物素標記的抗內(nei) 皮素1抗體(ti) 。再與(yu) HRP標記的鏈黴親(qin) 和素結合,形成免疫複合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然後加入顯色底物TMB,產(chan) 生藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。最後,在450nm處測定反應孔樣品吸光度(OD)值,樣本中的人內(nei) 皮素1濃度與(yu) OD值成正比,通過繪製標準曲線計算出樣本中人內(nei) 皮素1的濃度。
內(nei) 皮素hth体育下载地址操作步驟
1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鍾。
2.分組:取出96孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數,把剩餘(yu) 的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6個(ge) 濃度)、空白孔、待測樣品組。
注:為(wei) 減少實驗誤差,保證準確性,建議設置複孔。
3.加樣:依照標準品的順序分別加入00ul的標準品溶液於(yu) 空白微孔中;空白對照孔加入00ul的蒸餾水;其餘(yu) 微孔中加入00ul的待測樣本。
4.加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。
5.溫育:酶標板用封板紙密封後,放入濕盒內(nei) 於(yu) 37℃恒溫孵育小時。
6.洗板:用稀釋後的洗滌液注滿每孔,靜置5-30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙*拍幹。
7.顯色:各孔加入顯色劑A液50ul後,再加入顯色劑B液50ul。
8.終止:25-37℃下避光反應0-5分鍾,加入50ul終止液。
9.讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
內(nei) 皮素hth体育下载地址切勿冷凍,避免陽光直曬。未使用完的酶標板條應密封,2-8℃保存,具有方便、快速、靈敏等特點,因其性質、使用方便、價(jia) 格低廉等特點。
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