皮膚黑色素瘤細胞培養細胞注意事項

注意事項:

實驗進行前，無菌室及無菌操作台（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鍾滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬麵，並開啟無菌操作台風扇運轉0分鍾後，才開始實驗操作。每次操作隻處理一株細胞株，且即使培養(yang) 基相同亦不共享培養(yang) 基，以避免失誤混淆或細胞間汙染。實驗完畢後，將實驗物品帶出工作台，以70%ethanol擦拭無菌操作抬麵。操作間隔應讓無菌操作台運轉皮膚黑色素瘤細胞無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利於(yu) 氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭後才帶入無菌操作台內(nei) 。實驗操作應在抬麵之無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作。

小心取用無菌之實驗物品，避免造成汙染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開後，以手夾住瓶蓋並握住瓶身，傾(qing) 斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌麵。

工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套後才進行實驗。對於(yu) 來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，並選擇適當等級之無菌操作台（至少ClassⅡ）。操作過程中，應避免引起aerosol之產(chan) 生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，並避免尖銳針頭之傷(shang) 害等。

定期檢測下列項目：5.CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養(yang) 箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有汙染（水盤的水用無菌水，每周更換）。5.3.無菌操作台內(nei) 之airflow壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。6.水槽可添加消毒劑（Zephrin:750），定期更換水槽的水

粉末培養(yang) 基配製好後（加了血清），一般在4度盡量不要超過個(ge) 月，如在-20度存放時間可長一些，但也不要超過3-4個(ge) 月，可能對於(yu) 永生化細胞株來說要求不是太高，細胞嬌弱，放置時間不宜過長。

開紫外線照射台的時候，就將培養(yang) 基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鍾後，溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋裏加熱。一定要注意水浴鍋的衛生，有的常年不清洗，裏麵很髒，容易在外麵瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從(cong) 水浴鍋拿出後，找個(ge) 毛巾擦幹上麵的水。

細胞 停滯期（Stagnate phase） 細胞數量達到飽和密度後，如不及時進行傳(chuan) 代，細胞就會(hui) 停止增殖，進入停止期。此時細胞數持平，故也稱平台期（Plateau phase）。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動。如不進行分離傳(chuan) 代，細胞會(hui) 因培養(yang) 液中營養(yang) 耗盡、代謝產(chan) 物積聚、pH 下降等因素中毒，出現形態改變，貼壁細胞會(hui) 脫落，嚴(yan) 重的會(hui) 發生死亡，因此，應及時傳(chuan) 代。