AtT-20小鼠垂體瘤細胞培養步驟

培養(yang) 步驟：

1）複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鍾，棄去上清液，補加4-6mL*培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yang) 過夜。第二天換液並檢查細胞密度。

2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。

1、對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2min，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加5ml以上含10%血清的*培養(yang) 基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，*脫落後吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yang) 液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yang) 液的新皿中或者瓶中。

2、對於(yu) 懸浮細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鍾，棄上清液，補加1-2ml培養(yang) 液後吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或瓶中。

方法三：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yang) 基後，將剩餘(yu) 細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yang) 基新皿中或者瓶中。

1）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。棄培養(yang) 基後加入少量胰mei，細胞變圓脫落後，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鍾，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。